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荧光探针定量PCR检测结核分歧杆菌DNA
2015-09-24 16:37:13  来自:天津市第三中心医院

  结核病是由结核分歧杆菌引起的慢性传染病,可侵及许多脏器,以肺部受累形成肺结核为常见。排菌者为其重要的传染源。人体感染结核菌后不一定发病,当抵抗力降低或细胞介导的变态反应增高时,才可能引起临床发病。

  目前,在全球范围内,由于耐药结核菌的产生与扩展,结核菌和人体免疫缺陷病毒(HIV)的双重感染,人口的流动性大,及许多国家结核病的检查治疗不完善等原因,使全球结核病呈上升趋势,且发病人数急剧增加,全世界每年新发约900万结核病人,而每年死于结核病得人数达300万。而我国的结核病疫情亦相当严重,全国感染结核病人近3亿,因此尽早的发现新病人、控制传染源便显得尤为重要。

  目前结核病的临床诊断主要依靠病史、胸片、痰涂片、痰结核菌培养、PPD实验等方法,虽然这些方法有其优点,但阳性率低、耗时长、操作繁琐、影响因素多、不易标准化等原因,为结核病的诊断、预防和治疗带来了困扰。因此尽快找到一种快速而简单的结核病诊断方法尤为重要。

  天津市第三中心医院呼吸科近年来采用了应用荧光探针定量PCR检测结核分歧杆菌DNA的方法用于结核病人的早期诊断,传统的细菌培养较为费时,结核菌培养需要4-8周,应用PCR检测结核菌DNA只需1-2天,该方法不但解决了常规方法培养时间长、标本污染导致的假阳性、不能准确定量等问题,而且具有区分结核分歧杆菌与其他分歧杆菌、提高结核分歧杆菌的阳性检出率等优点。检出结核杆菌的阳性率显著高于痰涂片抗酸染色和改良罗氏培养法等方法。同时该方法可用于不同感染部位的标本,如痰、支气管灌洗液、血液、脑脊液、宫颈拭子、尿液、胸腹水等均可,起到尽早确诊、减少传染源的作用。

  虽然PCR检测结核菌DNA的方法较传统方法对于结核病的尽早确诊有了明显的提高,但该方法仍存在一定的局限性,主要表现为假阳性反应,主要原因有以下几点:(1)痰液标本成分复杂,可能存在某种物质干扰酶促反应(2)结核分歧杆菌DNA提取纯化方法复杂而影响其敏感性(2)实验室污染可能影响特异性。

  因此,在结核病的诊断上,虽然检测结核菌DNA的方法仍存在一定局限性,但检测时间短,与其他传统方法结合可明显提高检测的敏感性和特异性,为结核病的尽早确诊提供了一种有效、可行、简便的方法。

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